DNA I
Mae DNase I (Deoxyribonuclease I) yn endodeoxyriboniwclease sy'n gallu treulio DNA un llinyn neu ddwy.Mae'n adnabod ac yn hollti bondiau ffosffodiester i gynhyrchu monodeoxyniwcleotidau neu oligodeoxyniwcleotidau un llinyn neu ddwbl gyda grwpiau ffosffad yn y 5′-terminal a hydrocsyl yn y 3′-terfynell.Mae actifedd DNase I yn dibynnu ar Ca2+ a gellir ei actifadu gan ïonau metel deufalent fel Mn2+ a Zn2+.5mM Mae Ca2+ yn amddiffyn yr ensym rhag hydrolysis.Ym mhresenoldeb Mg2+, gallai'r ensym adnabod ar hap a hollti unrhyw safle ar unrhyw edefyn o DNA.Ym mhresenoldeb Mn2+, gellir adnabod llinynnau dwbl DNA ar yr un pryd a'u hollti bron ar yr un safle i ffurfio darnau DNA pen gwastad neu ddarnau DNA pen gludiog gyda 1-2 niwcleotidau yn ymwthio allan.
Eiddo Cynnyrch
Pancreas buchol DNase Mynegwyd I mewn system mynegiant burum a'i buro.
Cgwrthwynebwyr
| Cydran | Cyfrol | |||
| 0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, di-RNase | 20μL | 200μL | 1mL | 10mL |
| Clustogi 10×DNase I | 1mL | 1mL | 5 × 1mL | 5 × 10mL |
Cludiant a Storio
1. Sefydlogrwydd Storio: - 15 ℃ ~ -25 ℃ ar gyfer storio;
2.Transport Sefydlogrwydd: Cludiant o dan becynnau iâ;
3. Wedi'i gyflenwi yn: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% glyserol, pH 7.6 ar 25 ℃.
Diffiniad Uned
Diffinnir un uned fel swm yr ensym a fydd yn diraddio 1 µg o DNA pBR322 yn llwyr mewn 10 munud ar 37°C.
Rheoli Ansawdd
RNase:Nid yw 5U o DNase I gyda 1.6 μg MS2 RNA am 4 awr ar 37 ℃ yn cynhyrchu unrhyw ddiraddio fel y'i pennir gan electrofforesis gel agarose.
Bacteraidd Endotocsin:LAL-prawf, yn ôl rhifyn Tsieineaidd Pharmacopoeia IV 2020, dull prawf terfyn gel, rheol gyffredinol (1143).Dylai cynnwys endotocsin bacteriol fod yn ≤10 EU/mg.
Cyfarwyddiadau Defnydd
1.Paratowch yr ateb adwaith yn y tiwb di-RNase yn ôl y cyfrannau a restrir isod:
| Cydran | Cyfrol |
| RNA | X μg |
| 10 × DNase I Clustogi | 1 μL |
| DNase I, di-RNase(5U/μL) | 1 U fesul μg RNA |
| ddH2O | Hyd at 10 μL |
2.37 ℃ am 15 munud;
3.Ychwanegwch y byffer terfynu i atal yr adwaith, a chynheswch ar 65 ℃ am 10 munud i anactifadu DNase I. Gellir defnyddio'r sampl yn uniongyrchol ar gyfer yr arbrawf trawsgrifio nesaf.
Nodiadau
1.Defnyddiwch 1U DNase I fesul μg o RNA, neu 1U DNase I am lai nag 1μg o RNA.
Dylid ychwanegu 2.EDTA at grynodiad terfynol o 5 mM i amddiffyn RNA rhag cael ei ddiraddio yn ystod anactifadu ensymau.
