Cychwyn Cynnes Bst 2.0 DNA Polymerase (di-Glyserol)
Mae Bst DNA polymeras V2 yn deillio o Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I, sydd â gweithgaredd DNA polymeras 5′→3′ a gweithgaredd amnewid cadwyn cryf, ond dim gweithgaredd exonuclease 5′→3′.Mae Bst DNA Polymerase V2 yn ddelfrydol ar gyfer dadleoli llinynnau, mwyhad isothermol LAMP (chwyddo isothermol trwy gyfrwng dolen) a dilyniannu cyflym.Mae Bst DNA polymerase V2 yn fersiwn cychwyn poeth sy'n seiliedig ar Bst DNA polymerase V2 (HC5005A) a geir trwy dechnoleg addasu cildroadwy, a all atal gweithgaredd DNA polymeras ar dymheredd ystafell, felly gellir gweithredu a llunio'r system adwaith ar dymheredd yr ystafell i atal di-dor. - ymhelaethu penodol a gwella effeithlonrwydd adwaith, a gellir lyophilized fersiwn hwn.Yn ogystal, mae ei weithgaredd yn cael ei ryddhau ar dymheredd uchel, felly nid oes angen cam actifadu ar wahân.
Cydrannau
| Cydran | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNA polymeras V2 (di-glyserol)(8U/μL) | 0.2 mL | 1 ml | 10 ml |
| Clustogi 10×HC Bst V2 | 1.5 mL | 2 × 1.5 ml | 3 × 10 ml |
| MgSO4(100mM) | 1.5 mL | 2 × 1.5 ml | 2 × 10 ml |
Ceisiadau
1.Ymhelaethiad isothermol LAMP
2.Adwaith dadleoli sengl llinyn DNA
3.Dilyniant genynnau GC uchel
4.Dilyniant DNA o lefel nanogram.
Cyflwr Storio
Cludo o dan 0 ° C a chael ei storio ar -25 ° C ~ -15 ° C.
Diffiniad Uned
Diffinnir un uned fel swm yr ensym sy'n ymgorffori 25 nmol o dNTP i ddeunydd anhydawdd asid mewn 30 munud ar 65°C.
Rheoli Ansawdd
1.Assay Purdeb Protein (SDS-TUDALEN):Mae purdeb Bst DNA polymerase V2 yn ≥99% yn cael ei bennu gan ddadansoddiad SDS-PAGE gan ddefnyddio canfod Coomassie Blue.
2.EndoniwcleasGweithgaredd:Mae deori adwaith 50 μL sy'n cynnwys lleiafswm o 8 U o Bst DNA polymeras V2 gyda 1 μg λDNA am 16 awr ar 37 ℃ yn arwain at ddim diraddiad canfyddadwy fel y penderfynir.
3.Gweithgaredd Exonuclease:Mae deori adwaith 50 μL sy'n cynnwys lleiafswm o 8 U o Bst DNA polymerase V2 gyda 1 μg λ -Hind Ⅲ treulio DNA am 16 awr ar 37 ℃ yn arwain at unrhyw ddiraddiad canfyddadwy fel y'i pennwyd.
4.Gweithgaredd Nickase:Mae deori adwaith 50 μL sy'n cynnwys lleiafswm o 8 U o Bst DNA polymeras V2 gyda 1 μg pBR322 DNA am 16 awr ar 37°C yn arwain at ddim diraddiad canfyddadwy fel y penderfynwyd.
5.Gweithgaredd RNase:Mae deori adwaith 50 μL sy'n cynnwys lleiafswm o 8 U o Bst DNA polymeras V2 gyda 1.6 μg MS2 RNA am 16 awr ar 37°C yn arwain at ddim diraddiad canfyddadwy fel y penderfynwyd.
6.E. coliDNA:Mae 120 U o DNA Bst polymeras V2 yn cael ei sgrinio am bresenoldeb DNA genomig E. coli gan ddefnyddio TaqMan qPCR gyda paent preimio sy'n benodol ar gyfer y locws rRNA E. coli 16S.Yr halogiad DNA genomig E. coli yw ≤1 Copi.
Adwaith LAMP
| Cydrannau | 25μL |
| Clustogi 10×HC Bst V2 | 2.5 μL |
| MgSO4 (100mM) | 1.5 μL |
| dNTPs (10mM yr un) | 3.5 μL |
| SYTO™ 16 Gwyrdd (25×)a | 1.0 μL |
| Cymysgedd primerb | 6 μL |
| Bst DNA Polymerase V2 (Heb Glyserol) (8 U/uL) | 1 μL |
| Templed | × μL |
| ddH₂O | Hyd at 25 μL |
Nodiadau:
1) a.SYTOTM 16 Gwyrdd (25 ×): Yn ôl anghenion arbrofol, gellir defnyddio llifynnau eraill fel amnewidion;
2) b.Cymysgedd primer: a gafwyd trwy gymysgu 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2.5 µ M F3, 2.5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB a chyfeintiau eraill.
Adwaith a Chyflwr
Clustogi 1 × HC Bst V2, mae'r tymheredd deori rhwng 60 ° C a 65 ° C.
Anactifadu Gwres
80°C, 20 munud
