BspQI
Gellir mynegi BspQI yn ailgyfunol mewn E. coli a all adnabod safleoedd penodol ac a gynhyrchir o dan
Mae BspQI, sef endonuclease cyfyngiad IIs cyfyngiad endonuclease, yn deillio o straen E. coli ailgyfunol sy'n cario'r gen BspQI wedi'i glonio a'i addasu o Bacillus sphaericus.Gall adnabod safleoedd penodol, ac mae dilyniant adnabyddiaeth a safleoedd holltiad fel a ganlyn:
5' · · · · GCTCTTC(N) · · · · · ·
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · 5'
Nodweddion Cynnyrch
1. Gweithgarwch uchel, Treulio cyflym;
2. Gweithgaredd seren isel, gan sicrhau torri cywir fel "scalpel";
3. Heb ASS a heb darddiad anifeiliaid;
Sensitifrwydd Methylation
Dam methylation:Ddim yn Sensitif;
Dmethylation cm:Ddim yn Sensitif;
Methylation CpG:Ddim yn Sensitif;
Amodau storio
Dylai'r cynnyrch gael ei gludo ≤ 0 ℃;Storio ar gyflwr -25 ~ - 15 ℃.
Clustog storio
Tris-HCl 20mM, EDTA 0.1mM, 500 mM KCl, 1.0 mM dithiothreitol, Albwmin Ailgyfunol 500 µg/ml, 0. 1% Trition X- 100 a 50% glyserol (pH 7.0 @ 25°C).
Diffiniad Uned
Diffinnir un uned fel swm yr ensym sydd ei angen i dreulio 1µg o DNA rheolaeth fewnol mewn 1 awr ar 50°C mewn cyfanswm cyfaint adwaith o 50 µL.
Rheoli Ansawdd
Assay Purdeb Protein (SDS-TUDALEN):Pennwyd purdeb BspQI ≥95% gan ddadansoddiad SDS-PAGE.
RNase:Nid yw 10U o BspQI gyda 1.6μg MS2 RNA am 4 awr ar 50 ℃ yn cynhyrchu unrhyw ddiraddio fel y'i pennir gan electrofforesis gel agarose.
Gweithgaredd DNA Amhenodol:Nid yw 10U o BspQI gyda 1μg λ DNA ar 50 ℃ am 16 awr, o'i gymharu â 50 ℃ am 1 awr, yn cynhyrchu unrhyw DNA gormodol fel y'i pennir gan electrofforesis gel agarose.
Clymu a Torri:Ar ôl treulio 1 μg λDNA gyda 10U BspQI, gellir clymu darnau DNA â ligas DNA T4 ar 16ºC.A gellir ail-dorri'r darnau clymu hyn gyda BspQI.
E. coli DNA: Dangosodd darganfyddiad TaqMan qPCR E. coli 16s rDNA-benodol fod gweddillion genom E.coli ≤ 0.1pg/ul.
Gweddillion protein gwesteiwr:≤ 50 ppm
Bacteraidd Endotocsin: LAL-prawf, yn ôl rhifyn Tsieineaidd Pharmacopoeia IV 2020, dull prawf terfyn gel, rheol gyffredinol (1143).Dylai cynnwys endotocsin bacteriol fod yn ≤10 EU/mg.
System ymateb ac amodau
| Cydran | Cyfrol |
| BspQ I(10 U/μL) | 1 μL |
| DNA | 1 μg |
| 10 x BspQ I Clustogi | 5 μL |
| dd H2O | Hyd at 50 μL |
Amodau ymateb: 50 ℃, 1 ~ 16 awr.
Anactifadu gwres: 80 ° C am 20 munud.
Gall y system a'r amodau adwaith a argymhellir ddarparu effaith treulio ensymau cymharol dda, sydd ar gyfer cyfeirio yn unig, cyfeiriwch at y canlyniadau arbrofol am fanylion.
Cais cynnyrch
Cyfyngiad treuliad endonuclease, Clonio cyflym.
Nodiadau
1. Cyfaint yr ensym ≤ 1/10 o gyfaint yr adwaith.
2. Gall gweithgaredd seren ddigwydd pan fydd crynodiad glyserol yn fwy na 5%.
3. Gall gweithgaredd holltiad ddigwydd pan fo swbstrad yn is na'r gymhareb a argymhellir.
