CHO HCP ELISA Kit
Defnyddir dull imiwnosorbent ELISA Un cam yn yr assay hwn.Mae samplau sy'n cynnwys CHOK1 HCP yn adweithio ar yr un pryd â gwrthgorff gwrth-CHOK1 gafr wedi'i labelu gan HRP a gwrthgorff gwrth-CHOK1 wedi'i orchuddio ar blât ELISA, gan ffurfio cyfadeilad brechdanau o wrthgorff wedi'i labelu â gwrthgorff solet-phas-HCP.Gellir tynnu antigen-gwrthgorff heb ei rwymo trwy olchi plât ELISA.Ychwanegir y swbstrad TMB at y ffynnon ar gyfer adwaith digonol.Mae'r datblygiad lliw yn cael ei atal ar ôl ychwanegu'r datrysiad stopio, a darllenir OD neu werth amsugnedd yr ateb adwaith ar 450/650nm gyda darllenydd microplate.Mae'r gwerth OD neu'r gwerth amsugnedd yn gymesur â'r cynnwys HCP yn yr hydoddiant.O hyn, gellir cyfrifo'r crynodiad HCP yn yr ateb yn ôl y gromlin safonol.
Cais
Defnyddir y pecyn hwn i ganfod yn feintiol gynnwys gweddillion protein celloedd gwesteiwr CHOK1 mewn samplau.
Cgwrthwynebwyr
| S/N | Cydran | Crynodiad | Amodau Storio |
| 1 | Safon HCP CHOK1 | 0.5mg/ml | ≤-20 ℃ |
| 2 | Gwrth-CHO HCP-HRP | 0.5mg/ml | ≤-20 ℃, amddiffyn rhag golau |
| 3 | TMB | NA | 2-8 ℃, amddiffyn rhag golau |
| 4 | 20 × PBST 0.05% | NA | 2-8 ℃ |
| 5 | Stop ateb | NA | RT |
| 6 | Selwyr microplate | NA | RT |
| 7 | ASS | NA | 2-8 ℃ |
| 8 | Platiau arsugniad cyn-haenu | NA | 2-8 ℃ |
Offer Angenrheidiol
| Nwyddau Traul / Offer | Gweithgynhyrchu | Catalog |
| Darllenydd microplat | Dyfeisiau Moleciwlaidd | Spectra Max M5, M5e, neu gyfwerth |
| Thermomixer | Eppendorf | Eppendorf/5355, neu gyfwerth |
| Cymysgydd vortex | IKA | MS3 Digidol, neu gyfwerth |
Storio a sefydlogrwydd
1.Cludiant ar -25 ~ -15 ° C.
2.Mae amodau storio fel y dangosir yn Nhabl 1;mae cydrannau 1-2 yn cael eu storio ≤-20 ° C, 5-6 yn cael eu storio RT, 3 、4、7、8 yn cael eu storio ar 2-8 ℃;y cyfnod dilysrwydd yw 12 mis.
Paramedrau cynnyrch
1.Sensitifrwydd: 1ng/ml
2 .Amrediad canfod: 3- 100ng / mL
3.Cywirdeb: CV ≤ 10%, rhyng-assay CV≤ 15%
4.Cwmpas HCP: >80%
5.Penodoldeb: Mae'r pecyn hwn yn gyffredinol gan ei fod yn ymateb yn benodol â CHOK1 HCP yn annibynnol ar y broses buro.
Paratoi adweithydd
1 .PBST 0.05%
Cymerwch 15 ml o 20 × PBST 0.05%, wedi'i wanhau mewn ddH2O, ac wedi'i wneud hyd at 300 ml.
2 .1.0% ASS
Cymerwch 1g o BSA o'r botel a'i wanhau mewn 100 ml o PBST 0.05%, cymysgwch yn dda nes ei fod wedi hydoddi'n llwyr, a'i storio ar 2-8°C.Mae'r byffer gwanhau parod yn ddilys am 7 diwrnod.Argymhellir paratoi yn ôl yr angen.
3.Datrysiad canfod 2μg/mL
Cymerwch 48μL o 0.5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP a'i wanhau mewn 11,952μL o 1% BSA i gael crynodiad terfynol o hydoddiant canfod 2μg/mL.
4.QC a Pharatoi Safonau CHOK1 HCP
| Tiwb Nac ydw. | Gwreiddiol | Crynodiad | Cyfrol | 1% BSA | cyfanswm Cyfrol | Diwedd |
| A | Safonol | 0.5mg/ml | 10 | 490 | 500 | 10,000 |
| B | A | 10,000 | 50 | 450 | 500 | 1,000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Tabl: Paratoi QC a Safonau
Gweithdrefn Assay
1 .Paratowch yr adweithyddion fel y nodir yn “Paratoi Adweithydd” uchod.
2 .Cymerwch 50μL o safonau, samplau a QCs (cyfeiriwch at Dabl 3) i bob ffynnon, yna ychwanegwch 100μL o ddatrysiad Canfod (2μg/mL);Plât clawr gyda sealer, a gosod y plât ELISA ar y thermomixer.Deor ar 500rpm, 25 ± 3 ℃ am 2 awr.
3.Gwrthdroi'r microplate yn y sinc a thaflu'r hydoddiant cotio.Pibed 300μL o PBST 0.05% i mewn i bob ffynnon i olchi'r plât ELISA a thaflu'r toddiant, ac ailadrodd y golchi 3 gwaith.Gwrthdroi'r plât ar dywel papur glân a'i sychu.
4.Ychwanegu swbstrad 100μL ofTMB (gweler Tabl 1) at bob ffynnon, selio'r plât ELISA, a deor yn y tywyllwch ar 25 ± 3 ℃ am 15 munud.
5.Pibed 100μL o hydoddiant stop i bob ffynnon.
6.Mesur amsugnedd ar donfedd o 450/650nm gyda darllenydd microplate.
7.Dadansoddi data gan SoftMax neu feddalwedd cyfatebol.Plotiwch gromlin safonol trwy ddefnyddio model atchweliad logistaidd pedwar paramedr.
Enghraifft Cromlin Safonol
SYLWCH: Os yw crynodiad HCP yn y sampl yn fwy na therfyn uchaf y gromlin safonol, mae angen ei wanhau'n iawn gyda byffer gwanhau cyn ei brofi.
NODIADAU
Yr ateb stopio yw 2M o asid sylffwrig, dylech ei drin yn ofalus i osgoi tasgu!
