Pecyn Genoteipio Llygoden

Cat Rhif: HCR2021A

Mae'r cynnyrch hwn yn becyn a gynlluniwyd ar gyfer adnabod genoteipiau llygoden yn gyflym, gan gynnwys echdynnu DNA crai a system ymhelaethu PCR.Gellir defnyddio'r cynnyrch ar gyfer ymhelaethu PCR yn uniongyrchol o gynffon llygoden, clust, bysedd traed a meinweoedd eraill ar ôl holltiad syml gan Lysis Buffer a Proteinase k.Dim treuliad dros nos, echdynnu ffenol-clorofform na phuro colofn, sy'n syml ac yn byrhau'r amser mae arbrofion yn ei gymryd.Mae'r cynnyrch yn addas ar gyfer ymhelaethu ar ddarnau targed hyd at 2kb ac adweithiau PCR amlblecs gyda hyd at 3 phâr o preimwyr.Mae'r Cymysgedd PCR Uniongyrchol Meinwe Llygoden 2 × yn cynnwys DNA polymeras wedi'i beiriannu'n enetig, Mg²⁺, dNTPs a system glustogi wedi'i optimeiddio i ddarparu effeithlonrwydd ymhelaethu uchel a goddefgarwch atalydd, fel y gellir cynnal adweithiau PCR trwy ychwanegu templed a phaent preimio ac ailhydradu'r cynnyrch i 1 ×.Mae gan y cynnyrch PCR sydd wedi'i chwyddo gyda'r cynnyrch hwn sylfaen “A” amlwg ar y pen 3′ a gellir ei ddefnyddio'n uniongyrchol ar gyfer clonio TA ar ôl ei buro.

Cydrannau

Amodau Storio

Dylid storio cynhyrchion ar -25 ~ -15 ℃ am 2 flynedd.Ar ôl dadmer, gellir storio Lysis Buffer ar 2 ~ 8 ℃ ar gyfer defnydd lluosog tymor byr, a chymysgu'n dda wrth ei ddefnyddio.

Cais

Mae'r cynnyrch hwn yn addas ar gyfer dadansoddiad cnocio llygoden, canfod trawsenynnol, genoteipio ac yn y blaen.

Nodweddion

1 .Gweithrediad syml: nid oes angen echdynnu DNA genomig;

2 .Cymhwysiad eang: addas ar gyfer ymhelaethu'n uniongyrchol ar feinweoedd llygoden amrywiol.

Cyfarwyddiadau

1 .Rhyddhau DNA genomig

1) Paratoi lysate

Mae lysate meinwe yn cael ei baratoi yn ôl nifer y samplau llygoden sydd i'w lysate (dylid paratoi lysate meinwe ar y safle yn ôl y dos a'i gymysgu'n drylwyr i'w ddefnyddio), ac mae cyfran yr adweithyddion sydd eu hangen ar gyfer un sampl fel a ganlyn:

2) Paratoi Sampl a Lysis

Defnydd Meinwe a Argymhellir

Cymerwch swm priodol o samplau meinwe llygoden mewn tiwbiau centrifuge glân, ychwanegwch 200μL o lysate meinwe ffres i bob tiwb centrifuge, fortecs ac ysgwyd, yna deor ar 55 ℃ am 30 munud, ac yna gwres ar 98 ℃ am 3 munud.

3) Centrifugation

Ysgwydwch y lysate yn dda a'i allgyrchu ar 12,000 rpm am 5 munud.Gellir defnyddio'r supernatant fel templed ar gyfer ymhelaethu ar PCR.Os oes angen y templed ar gyfer storio, trosglwyddwch y supernatant i diwb centrifuge di-haint arall a'i storio ar -20 ℃ am 2 wythnos.

2 .Ymhelaethiad PCR

Tynnwch y Cymysgedd PCR Uniongyrchol Meinwe Llygoden 2 × o -20 ℃ a'i ddadmer ar rew, ei gymysgu wyneb i waered a pharatoi'r system adwaith PCR yn ôl y tabl canlynol (gweithredwch ar rew):

Nodyn:

a) Ni ddylai'r swm a ychwanegir fod yn fwy na 1/10 o'r system, ac os ychwanegir gormod, efallai y bydd ymhelaethiad PCR yn cael ei atal.

Amodau PCR a Argymhellir

Nodyn:

a) Tymheredd anelio: Gan gyfeirio at werth Tm y paent preimio, argymhellir gosod y tymheredd anelio i werth Tm llai y paent preimio +3 ~ 5 ℃.

Problemau ac Atebion Cyffredin

1 .Dim stribedi wedi'u targedu

1) Cynnyrch lysis gormodol.Dewiswch y swm mwyaf priodol o dempled, fel arfer dim mwy na 1/10 o'r system;

2) Maint sampl rhy fawr.Gwanhewch y lysate 10 gwaith ac yna ymhelaethu, neu leihau maint y sampl ac ail-lysis;

3) Nid yw samplau meinwe yn ffres.Argymhellir defnyddio samplau meinwe ffres;

4) Ansawdd preimio gwael.Defnyddiwch DNA genomig ar gyfer ymhelaethu i wirio ansawdd y paent preimio a gwneud y gorau o ddyluniad y paent preimio.

2 .Ymhelaethiad amhenodol

1) Mae'r tymheredd anelio yn rhy isel ac mae nifer y cylch yn rhy uchel.Cynyddu'r tymheredd anelio a lleihau nifer y cylchoedd;

2) crynodiad templed yn rhy uchel.Lleihau faint o dempled neu wanhau'r templed 10 gwaith ar ôl ymhelaethu;

3) Penodoldeb paent preimio gwael.Optimeiddio'r dyluniad paent preimio.

Nodiadau

1 .Er mwyn osgoi croeshalogi rhwng samplau, dylid paratoi offer samplu lluosog, a gellir glanhau wyneb yr offer gyda hydoddiant hypoclorit sodiwm 2% neu lanhawr asid niwclëig ar ôl pob samplu os oes angen ei ddefnyddio dro ar ôl tro.

2 .Argymhellir defnyddio meinweoedd llygoden ffres, ac ni ddylai'r gyfaint samplu fod yn rhy fawr i osgoi effeithio ar y canlyniadau ymhelaethu.

3.Dylai Lysis Buffer osgoi rhewi-dadmer yn aml, a gellir ei storio ar 2 ~ 8 ℃ ar gyfer defnydd lluosog tymor byr.Os caiff ei storio ar dymheredd isel, gall dyddodiad ddigwydd, a rhaid ei doddi'n llawn cyn ei ddefnyddio.

4.Dylai PCR Mix osgoi rhewi-dadmer yn aml, a gellir ei storio ar 4 ℃ i'w ddefnyddio dro ar ôl tro yn y tymor byr.

5.Mae'r cynnyrch hwn ar gyfer ymchwil arbrofol wyddonol yn unig ac ni ddylid ei ddefnyddio mewn diagnosis neu driniaeth glinigol.