Rnase A
Mae Ribonuclease A (RNAseA) yn polypeptid un edefyn sy'n cynnwys 4 bond desylffid gyda phwysau moleciwlaidd o tua 13.7 kDa.Mae RNase A yn endoribonuclease sy'n diraddio RNA un edefyn yn benodol ar weddillion C ac U.Yn benodol, mae'r holltiad yn cydnabod y bond ffosffodiester a ffurfiwyd gan y 5′-ribose o niwcleotid a'r grŵp ffosffad ar ribos 3′ y niwcleotid pyrimidine cyfagos, fel bod y ffosffadau 2, 3′-Cylchol yn cael eu hydrolysu i'r 3 cyfatebol. ′ffosffadau niwcleosid (ee pG-pG-pC-pA-pG yn cael ei hollti gan RNase A i gynhyrchu pG-pG-pCp ac A-PG).RNase A yw'r mwyaf gweithredol wrth hollti RNA un edefyn.Crynodiad gweithio a argymhellir yw 1-100μG / mL, sy'n gydnaws â systemau adwaith amrywiol.Gellir defnyddio crynodiad halen isel (0-100 mM NaCl) i dorri cadwyni RNA un-sownd, RNA dwbl, a chadwyni RNA a ffurfiwyd gan hybridization RNA-DNA.Fodd bynnag, ar grynodiad halen uchel (≥0.3 M), mae RNase A yn unig yn hollti RNA un edefyn yn benodol.
Defnyddir RNase A yn fwyaf cyffredin i gael gwared ar RNA wrth baratoi DNA plasmid neu DNA genomig. Gall p'un a yw DNase yn weithredol ai peidio yn ystod y broses baratoi effeithio'n hawdd ar yr adwaith.Gellir defnyddio'r dull traddodiadol o ferwi mewn baddon dŵr i anactifadu gweithgaredd DNA.Nid yw'r cynnyrch hwn yn cynnwys DNase a proteas, ac nid oes angen triniaeth wres arno cyn ei ddefnyddio.Yn ogystal, gellir defnyddio'r cynnyrch hwn hefyd mewn arbrofion bioleg moleciwlaidd megis dadansoddiad amddiffyn RNase a dadansoddiad dilyniant RNA.
Amodau Storio
Gellir storio'r cynnyrch ar -25 ～-15 ℃, yn ddilys am 2 flynedd.
Cyfarwyddiadau
Dyma un o'r dulliau cyffredin ar gyfer paratoi datrysiad storio RNase A.Gellir ei baratoi hefyd gandulliau eraill yn ôl y dulliau traddodiadol yn y labordy neu lenyddiaeth gyfeirio (felhydoddi'n uniongyrchol mewn hydoddiant 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 neu Tris-NaCl)
1. Defnyddiwch asetad sodiwm 10 mM (pH 5.2) i baratoi 10 mg/mL o hydoddiant storio RNase A
2. Gwresogi ar 100 ℃ am 15 munud
3. Oer i dymheredd ystafell, ychwanegu 1/10 cyfaint o 1 M Tris-HCl (pH 7.4), addasu ei pH i 7.4 (ar gyferenghraifft, ychwanegwch 500 ml o doddiant storio RNase 10g/ml 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. Wedi'i is-becynnu ar -20 ℃ ar gyfer storio wedi'i rewi, a all fod yn sefydlog am hyd at 2 flynedd.
[Nodiadau]: Wrth ferwi hydoddiant RNAseA o dan amodau niwtral, bydd dyodiad RNase yn ffurfio;Berwch ef ar pH is, ac os oes dyddodiad, gellir ei arsylwi, a allai gael ei achosi gan bresenoldeb amhureddau protein.Os canfyddir gwaddod ar ôl berwi, gellir cael gwared ar amhureddau trwy allgyrchu cyflym (13000rpm), ac yna eu his-bacio i'w storio'n rhewi.
Gwybodaeth am gynnyrch
| Cyfystyron | Ribonuclease I;Ribonuclease pancreatig;Riboniwcleas 3'-pyrimidnooligonucleotidohydrolase;Rnase A;Endoribonulcease I |
| Rhif CAS. | 9001-99-4 |
| Ymddangosiad | Powdwr lyophilized gwyn |
| Pwysau moleciwlaidd | ~ 13.7kDa (dilyniant asid amino) |
| Gwerth Ph | 7.6 (ystod gweithgaredd 6-10) |
| Tymheredd Addas | 60 ℃ (Amrediad gweithgaredd 15-70 ℃) |
| Asiant ysgogi | Na2+.K+ |
| Atalydd | Rnase Atalydd |
| Dull anactifadu | Ni ellir ei anactifadu gan wresogi, awgrymir defnyddio colofn centrifuge |
| Tarddiad | Buchol |
| Hydoddedd | Hydawdd mewn dŵr (10mg/ml) |
| Colled ar sych | ≤5.0% |
| Gweithgaredd ensymau | ≥60 uned Kunitz/mg |
| Pwynt isoelectrig | 9.6 |
Nodiadau
Er eich diogelwch a'ch iechyd, gwisgwch gotiau labordy a menig tafladwy i'w defnyddio.
