Polymerase DNA Taq Gwyllt
Mae Taq DNA Polymerase yn bolymeras DNA thermostable o Thermus aquaticus YT-1, sy'n meddu ar actifedd polymeras 5′→3′ a gweithgaredd endonuclease fflap 5´.
Cydrannau
| Cydran | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10 × Clustog Taq | 2 × 1 ml | 2 × 10 ml | 2 × 50 ml | 5 × 200 ml |
| Polymeras DNA Taq (5 U/μL) | 0.1 ml | 1 ml | 5 mL | 5 × 10 ml |
Cyflwr Storio
Cludo o dan 0 ° C a chael ei storio ar -25 ° C ~ -15 ° C.
Diffiniad Uned
Diffinnir un uned fel swm yr ensym sy'n ymgorffori 15 nmol o dNTP i ddeunydd anhydawdd asid mewn 30 munud ar 75°C.
Rheoli Ansawdd
1.Assay Purdeb Protein (SDS-TUDALEN):Roedd purdeb polymeras DNA Taq yn ≥95% a bennwyd gan ddadansoddiad SDS-PAGE.
2.Endonuclease Gweithgaredd:Mae lleiafswm o 5 U o polymeras DNA Taq gydag 1 μg λDNA am 16 awr ar 37 ℃ yn arwain at ddim diraddio canfyddadwy fel y penderfynir.
3.Gweithgaredd Exonuclease:Mae lleiafswm o 5 U o polymeras DNA Taq gyda 1 μg λ -Hind Ⅲ treulio DNA am 16 awr ar 37 ℃ yn arwain at unrhyw ddiraddiad canfyddadwy fel y penderfynir.
4.Gweithgaredd Nickase:Mae lleiafswm o 5 U o bolymeras DNA Taq gydag 1 μg pBR322 DNA am 16 awr ar 37°C yn arwain at ddim diraddiad canfyddadwy fel y penderfynwyd.
5.Gweithgaredd RNase:Mae lleiafswm o 5 U o bolymeras DNA Taq gyda 1.6 μg MS2 RNA am 16 awr ar 37 ° C yn arwain at ddim diraddiad canfyddadwy fel y penderfynwyd.
6.E. coliDNA:5 U o Taq DNA DNA polymeras yn cael ei sgrinio am bresenoldeb DNA genomig E. coli gan ddefnyddio TaqMan qPCR gyda paent preimio penodol ar gyfer y locws rRNA E. coli 16S.Yr halogiad DNA genomig E. coli yw ≤1 Copi.
7.Ymhelaethiad PCR (5.0 kb DNA Lambda)- Mae adwaith 50 µL sy'n cynnwys 5 ng DNA Lambda gyda 5 uned o Taq DNA Polymerase am 25 cylch o ymhelaethu PCR yn arwain at y cynnyrch 5.0 kb disgwyliedig.
Gosod Adwaith
| Cydrannau | Cyfrol |
| Templed DNAa | dewisol |
| 10 μM Ymlaen Primer | 1 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 1 μL |
| Cymysgedd dNTP (10mM yr un) | 1 μL |
| Clustog 10 × Taq | 5 μL |
| Polymeras DNA Taqb | 0.25 μL |
| Dŵr di-niwclear | Hyd at 50 μL |
Nodiadau:
1) Mae crynodiad adwaith gorau posibl gwahanol dempledi yn wahanol.Mae'r tabl canlynol yn dangos y templed a argymhellir ar gyfer defnyddio system adwaith 50 µL.
| DNA | Swm |
| Genomig | 1 ng-1 μg |
| Plasmid neu Feirol | 1 tud- 1 ng |
2) Gall y crynodiad gorau posibl o Taq DNA Polymerase amrywio o 0.25 µL ~ 1 µL mewn cymwysiadau arbenigol.
AdwaithRhaglen
| Cam | Tymheredd(°C) | Amser | Beiciau |
| Dadnatureiddio cychwynnola | 95 ℃ | 5 munud | - |
| Dadnatureiddio | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 Cycles |
| Aneliob | 60 ℃ | 15 s | |
| Estyniad | 72 ℃ | 1kb/munud | |
| Estyniad Terfynol | 72 ℃ | 5 munud | - |
Nodiadau:
1) Mae'r cyflwr dadnatureiddio cychwynnol yn addas ar gyfer y rhan fwyaf o adweithiau ymhelaethu a gellir ei addasu yn ôl cymhlethdod strwythur y templed.Os yw strwythur y templed yn gymhleth, gellir ymestyn yr amser cyn dadnatureiddio i 5 - 10 munud i wella'r effaith dadnatureiddio cychwynnol.
2) Mae angen addasu'r tymheredd anelio yn ôl gwerth Tm y paent preimio, sydd fel arfer wedi'i osod i 3 ~ 5 ℃ yn is na gwerth Tm y paent preimio;Ar gyfer templedi cymhleth, mae angen addasu tymheredd anelio ac ymestyn amser ymestyn i gyflawni ymhelaethiad effeithlon.
