Superstart qPCR Premix plus-UNG
Cat Rhif: HCB5071E
Mae Superstart qPCR Premix plus-UNG yn adweithydd arbenigol a ddyluniwyd ar gyfer adweithiau ansoddol a meintiol PCR Amser Real gan ddefnyddio canfod yn seiliedig ar stiliwr, a ddatblygwyd yn benodol ar gyfer prosesau lyoffileiddio.Mae'n cynnwys ensym cychwyn poeth newydd Hotstart Taq plus (DG), sydd â'i weithgaredd ensymau Taq wedi'i selio ar dymheredd yr ystafell, gan atal ymhelaethiad amhenodol a achosir gan anelio paent preimio amhenodol neu ffurfio pylu paent preimio o dan amodau tymheredd isel, gan wella. penodoldeb yr adwaith mwyhau.Mae'r adweithydd hwn yn defnyddio byffer penodol qPCR wedi'i optimeiddio a system gwrth-halogi UNG/dUTP i gyflawni cychwyn poeth cyflym, gan wella effeithlonrwydd a sensitifrwydd adweithiau qPCR yn fawr.Gall gael cromliniau safonol da mewn ystod eang o feysydd meintiol a pherfformio meintioli'n gywir, gan atal ymhelaethiad positif ffug a achosir gan gynhyrchion PCR gweddilliol neu halogiad aerosol yn effeithiol.Mae'r adweithydd hwn yn gydnaws â'r rhan fwyaf o offerynnau PCR meintiol fflwroleuol gan weithgynhyrchwyr fel Applied Biosystems, Eppendorf, Bio- Rad a Roche ac ati, ac mae'n arddangos sefydlogrwydd da ar ffurf lyophilized.
Cyfansoddiad adweithydd
1. 5×HotstartPremix plws-UNG (Mg2+am ddim) (DG)
2. 250 mM MgCl2
3. 4 × lyoprotectant (dewisol)
Amodau Storio
Storio hirdymor ar -20 ℃;gellir ei storio ar 4 ℃ am hyd at 3 mis.Cymysgwch yn dda cyn ei ddefnyddio aosgoi rhewi a dadmer dro ar ôl tro.
Protocol Beicio
| Gweithdrefn | Temp. | Amser | Beicio |
| Treuliad | 50 ℃ | 2 mun | 1 |
| Ysgogi polymeras | 95 ℃ | 1 ~ 5 munud | 1 |
| Denatur | 95 ℃ | 10 ~ 20 eiliad | 40-50 |
| Anelio ac Ymestyn | 56 ~ 64 ℃ | 20 ~ 60 eiliad | 40-50 |
qPCR Adwaith Hylif SyParatoad coesyn
|
Cyfansoddiad |
25µL Cyfrol |
Cyfrol 50µL |
Crynhoad Terfynol |
| 5×HotstartPremix ynghyd ag UNG(Mg2+am ddim) (DG) | 5µL | 10µL | 1 × |
| 250mM MgCl2 | 0.45µL | 0.9µL | 4.5 mM |
| 4 × lyoprotectant1 | 6.25µL | 12.5µL | 1 × |
| 25×Primer-Probe Cymysgedd2 | 1µL | 2µL | 1 × |
| Templed DNA3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | I 25µL | I 50µL | —— |
1. Mae crynodiad terfynol o 0.2μM ar gyfer paent preimio fel arfer yn rhoi canlyniadau da;pan fo perfformiad adwaith yn wael, addaswch y crynodiad preimio o fewn yr ystod o 0.2-1μM yn ôl yr angen.Fel arfer caiff crynodiad chwiliwr ei optimeiddio o fewn yr ystod o 0.1-0.3μM trwy arbrofion graddiant i ddod o hyd i'r cyfuniadau gorau posibl.
2. Mae nifer copi y genynnau targed sydd wedi'u cynnwys mewn gwahanol fathau o dempledi yn amrywio;os oes angen, gellir gwanhau graddiant i bennu'r swm ychwanegu templed gorau posibl.
3. Gall y system hon gael ei lyophilized;pan fydd cwsmeriaid yn defnyddio'r system hon heb ofynion rhewi-sychu, gellir ychwanegu 4 × lyoprotectant yn ddetholus; os oes angen cynhyrchion rhewi-sychu, yn ystod dilysu perfformiad cynnyrch cam adweithyddion hylif, rhaid iddo ychwanegu 4 × lyoprotectant i sicrhau cysondeb â chydrannau'r system lyophilized. ac effeithiau.
Pan ddefnyddir y systemd ar gyfer rhewi-sychu, paratoi'r system as canlynol:
| Cyfansoddiad | 25µL System Adwaith |
| 5 × HotstartPremix plws-UNG (Mg2+am ddim) (DG) | 5µL |
| 250mM MgCl2 | 0.45µL |
| 4 × lyoprotectant | 6.25µL |
| 25×Primer-Probe Cymysgedd | 1µL |
| ddH2O | I 18 ~ 20µL |
* Os oes angen systemau eraill ar gyfer rhewi-sychu, ymgynghorwch ar wahân.
Proses Lyophilizationss
| Gweithdrefn | Temp. | Amser | Cyflwr | Pwysau |
| Rhag-rewi | 4 ℃ | 30 mun | Daliwch |
1 atm |
| -50 ℃ | 60 mun | Oeri | ||
| -50 ℃ | 180 mun | Daliwch | ||
| Sychu Cynradd | -30 ℃ | 60 mun | Gwresogi |
Gwactod Ultimate |
| -30 ℃ | 70 mun | Daliwch | ||
| Sychu Eilaidd | 25 ℃ | 60 mun | Gwresogi |
Gwactod Ultimate |
| 25 ℃ | 300 mun | Daliwch |
2. Mae'r broses lyophilization uchod ar gyfer cyfeirio yn unig.Mae gan wahanol fathau o gynnyrch a sychwyr rhewi gwahanol baramedrau gwahanol, felly gellir gwneud addasiadau yn ôl y rhai gwirioneddolamodau yn ystod y defnydd.
3. Gall gwahanol brosesau lyophilization fod yn addas ar gyfer gwahanol feintiau swp o lyophilizedcynhyrchion, felly mae'n rhaid cynnal dilysiad profi digonol pan gaiff ei ddefnyddio ar gyfer cynhyrchu ar raddfa fawr.
Cyfarwyddyd ar gyfer defnyddio lyophilized powdr
1. byr centrifuge y powdr lyophilized;
2. Ychwanegu templed asid niwclëig i'r powdr lyophilized ac ychwanegu dŵr hyd at 25µL;
3. cymysgu'n dda gan centrifugation a rhedeg ar beiriant.
Rheoli Ansawdd:
1. Profion swyddogaethol: sensitifrwydd, penodoldeb, atgynhyrchu qPCR.
2. Dim gweithgaredd niwcleas alldarddol, dim halogiad endo/exonuclease alldarddol.
Gwybodaeth Dechnegol:
1. Superstart qPCR Mae Premix plus-UNG yn defnyddio ensym cychwyn poeth newydd sy'n galluogi cychwyn poeth cyflym o fewn 1 ~ 5 munud;trwy lunio byffer arbennig mae'n addas ar gyfer adweithiau PCR meintiol fflwroleuol amlblecs.
2. Mae ganddo benodoldeb uwch sy'n gwella'n sylweddol sensitifrwydd canfod terfyn meintiol PCR fflworoleuedd, gan wneud cromliniau ymhelaethiad yn normaleiddio, mae gwerth fflworoleuedd yn cael gwelliant amlwg mewn templedi crynodiad isel, sy'n addas fel adweithyddion canfod meintiol PCR fflworoleuedd sensitifrwydd uchel.
3. Ar gyfer paent preimio â thymheredd anelio is neu ddarnau hirach na 200bp, argymhellir dull 3 cham.
4. Mae effeithlonrwydd defnyddio dUTP a sensitifrwydd i ensym UNG yn wahanol ar gyfer gwahanol enynnau targed, felly os yw defnyddio system UNG yn arwain at ostyngiad mewn sensitifrwydd canfod, dylid addasu a optimeiddio'r system adwaith.Os oes angen cymorth technegol, cysylltwch â'n cwmni.
5. Defnyddiwch ardaloedd a phibedau pwrpasol cyn ac ar ôl ymhelaethu, gwisgo menig yn ystod y llawdriniaeth a'u disodli'n aml;peidiwch ag agor y tiwb adwaith ar ôl cwblhau PCR i leihau halogiad samplau gan gynhyrchion PCR.
