Ultra Niwcleas
Mae UltraNuclease yn endoniwclaese wedi'i beiriannu'n enetig sy'n deillio o Serratia marcescens, sy'n gallu diraddio DNA neu RNA, naill ai'n sownd dwbl neu sengl, llinol neu gylchol o dan ystod eang o gyflwr, yn diraddio asidau niwclëig yn llwyr yn oligoniwcleotidau 5'-monoffosffad gyda hyd 3-5bas. .Ar ôl addasu peirianneg enetig, roedd theproduct eplesu, mynegi, a purifiedin Escherichia coli (E. coli), sy'n reducestheviscosity o supernatant cell a cell lysate ymchwil incientific, ond hefyd yn gwella effeithlonrwydd puro ac ymchwil swyddogaethol ofprotein.Gellir ei ddefnyddio hefyd yn y therapi genynnau, puro firws, cynhyrchu brechlyn, diwydiant fferyllol protein a polysacarid fel adweithydd tynnu asid niwclëig gweddillion gwesteiwr.
Nodweddion Cynnyrch
| Rhif CAS. | 9025-65-4 |
| Rhif EC. | |
| Pwysau Moleciwlaidd | 30kDa |
| Pwynt Isoelectrig | 6.85 |
| Purdeb Protein | ≥99% (SDS-TUDALEN & SEC-HPLC) |
| Gweithgaredd Penodol | ≥1.1 × 106U/mg |
| Tymheredd Optimum | 37°C |
| pH optimwm | 8.0 |
| ProteaseActivity | negyddol |
| Biofaich | ＜10CFU/100,000U |
| Protein Gwesteiwr Gweddilliol | ≤10ppm |
| Metal trwm | ≤10ppm |
| Endotoxin bacteriol | ＜0.25EU/1000U |
| Clustog Storio | 20mM Tris-HCl, pH 8.0, 2mM MgCl2 ， 20mM NaCl ， 50% Glyserol |
Amodau storio
Cludiant ≤0 ° C ；-25 ~ -15 ° C Storio, 2 flynedd o ddilysrwydd (osgoi rhewi-dadmer).
Diffiniad Uned
Diffiniwyd swm yr ensym a ddefnyddir i newid gwerth amsugno △A260 gan 1.0 o fewn 30 munud ar 37 ° C, pH 8.0, sy'n cyfateb i DNA sberm eog 37μg wedi'i dreulio trwy dorri'n oligonucleotidau, fel uned weithredol (U).
Rheoli ansawdd
Protein Gwesteiwr Gweddilliol: cit ELISA
•Proteas Gweddillion: Ymatebodd UltraNuclease 250KU/mL gyda swbstrad am 60 munud, ni chanfuwyd unrhyw weithgaredd.
•Endotoxin bacteriol: LAL-Prawf, Pharmacopoeia Gweriniaeth Pobl Tsieina Cyfrol 4 (Argraffiad 2020) gel prawf terfyn dull.Rheolau Cyffredinol (1143).
•Biofaich: Pharmacopoeia Gweriniaeth Pobl Tsieina Cyfrol 4 (Argraffiad 2020)— Cyffredinol
Rheolau ar gyfer Prawf Sterility (1101), Safon Genedlaethol PRC, GB 4789.2-2016.
•Metal trwm:ICP-AES, HJ776-2015.
Gweithrediad
Cafodd gweithgaredd UltraNuclease ei atal yn sylweddol pan oedd crynodiad SDS dros 0.1% neu EDTA
roedd y crynodiad dros 1mM.Syrffactydd Triton X- 100, Tween 20 a Tween 80 heb unrhyw effaith ar niwcleas
eiddo pan oedd y crynodiad o dan 1.5%.
| Gweithrediad | Gweithrediad Optimal | Gweithrediad Dilys |
| Tymheredd | 37 ℃ | 0-45 ℃ |
| pH | 8.0-9.2 | 6.0- 11.0 |
| Mg2+ | 1-2mM | 1- 15mM |
| DTT | 0- 100mM | >100mM |
| 2-Mercaptoethanol | 0- 100mM | >100mM |
| Ion metel monovalent （Na+, K+ ac ati） | 0-20mM | 0-200mM |
| PO43- | 0- 10mM | 0- 100mM |
Defnydd a Dos
• Cael gwared ar asid niwclëig alldarddol o gynhyrchion brechlyn, lleihau'r risg o wenwyndra asid niwclëig gweddilliol a gwella diogelwch cynnyrch.
• Lleihau gludedd hylif porthiant a achosir gan asid niwclëig, lleihau amser prosesu a chynyddu cynnyrch protein.
• Tynnwch yr asid niwclëig sy'n lapio gronyn (feirws, corff cynhwysiant, ac ati), sy'n ffafriol
i ryddhad a phuro y gronyn.
| Math Arbrofol | Cynhyrchu Protein | Firws, brechlyn | Cyffuriau Cell |
| Rhif Celloedd | 1g pwysau gwlyb cell (ail-aildynnu gyda byffer 10ml) | eplesu 1L hylif supernatant | diwylliant 1L |
| Isafswm Dos | 250U | 100U | 100U |
| Dos a Argymhellir | 2500U | 25000U | 5000U |
• Gall triniaeth niwclear wella cydraniad ac adferiad y sampl ar gyfer cromatograffaeth colofn, electrofforesis a dadansoddi blotio.
• Mewn therapi genynnau, mae asid niwclëig yn cael ei dynnu i gael firysau puredig sy'n gysylltiedig ag adeno.
