DNA I (Rnase Free)(5u/ul)
Cat Rhif: HC4007A
Mae DNase I (Deoxyribonuclease I) yn endodeoxyriboniwclease sy'n gallu treulio DNA un llinyn neu ddwy.Mae'n adnabod ac yn hollti bondiau ffosffodiester i gynhyrchu monodeoxyniwcleotidau neu oligodeoxyniwcleotidau un llinyn neu ddwbl gyda grwpiau ffosffad yn y 5'-terfynell a hydrocsyl yn y 3'-terfynell.Mae gweithgaredd DNA I yn dibynnu ar Ca2+a gellir ei actifadu gan ïonau metel deufalent fel Mn2+ac Zn2+.5 mM Ca2+yn amddiffyn yr ensym rhag hydrolysis.Ym mhresenoldeb Mg2+, gallai'r ensym adnabod ar hap a hollti unrhyw safle ar unrhyw edefyn o DNA.Yn ngwydd Mn2+, gellir adnabod llinynnau dwbl DNA ar yr un pryd a hollti bron yr un safle i ffurfio darnau DNA pen gwastad neu ddarnau DNA pen gludiog gyda 1-2 niwcleotidau yn ymwthio allan.
Cydrannau
| Enw | 0.1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I, di-RNase | 20μL | 200μL | 1mL | 10 ml |
| Clustogi 10×DNase I | 1mL | 1mL | 5 × 1mL | 5 × 10 ml |
Amodau storio
-25 ℃ ~ -15 ℃ ar gyfer storio;Cludiant o dan becynnau iâ.
Cyfarwyddiadau
1. Paratowch yr ateb adwaith yn y tiwb di-RNase yn ôl y cyfrannau a restrir isod:
| Cydran | Cyfrol |
| RNA | X µg |
| 10 × DNase I Clustogi | 1μL |
| DNase I, di-RNase(5U/μL) | 1 U fesul µg RNA① |
| ddH2O | Hyd at 10μL |
Nodyn: ① Cyfrifwch gyfaint DNase I y mae angen ei ychwanegu yn seiliedig ar faint o RNA.
2. 37 ℃ am 15 munud;
3. Ychwanegu 0.5M EDTA i'r crynodiad terfynol o 2.5mM ~ 5mM, a gwres ar 65 ℃ am 10 munud i atal yr adwaith.Gellir defnyddio'r sampl yn uniongyrchol ar gyfer yr adwaith nesaf fel trawsgrifio o chwitharbrawf.
Diffiniad Uned
Diffinnir un uned fel swm yr ensym a fydd yn diraddio 1µg o pBR322 yn llwyrDNA mewn 10 munud ar 37 ℃.
Rheoli Ansawdd
RNase:Nid yw 5U o DNase I gyda 1.6µg MS2 RNA am 4 awr ar 37 ℃ yn cynhyrchu unrhyw ddiraddio fela bennir gan electrofforesis gel agarose.
Nodiadau
1. Paratowch 0.5MEDTA gennych chi'ch hun.
2. Defnyddiwch 1U DNase I fesul µg o RNA.Fodd bynnag, os yw'r RNA yn llai nag 1µg, defnyddiwch 1U DNase I.
3. Rhowch yr ensym ar rew yn ystod y llawdriniaeth.
