Proteinase K NGS (powdr)
Cat Rhif: HC4507A
Mae NGS Protease K yn proteas serine sefydlog gyda gweithgaredd ensymau uchel a phenodoledd swbstrad eang. Mae'r ensym yn ffafriol yn dadelfennu bondiau ester a bondiau peptid wrth ymyl y C-terminal o asidau amino hydroffobig, asidau amino sy'n cynnwys sylffwr ac asidau amino aromatig.Felly, fe'i defnyddir yn aml i ddiraddio proteinau yn peptidau byr.Mae NGS Protease K yn broteas serine nodweddiadol gyda'r Asp39-Ei69-Ser224triad catalytig sy'n unigryw i broteasau serine, ac mae'r ganolfan gatalytig wedi'i hamgylchynu gan tow Ca2+safleoedd rhwymo ar gyfer sefydlogi, gan gynnal gweithgaredd ensymau uchel o dan ystod ehangach o amodau.
Manyleb
| Ymddangosiad | Powdwr amorffaidd gwyn i wyn, wedi'i lyoffileiddio |
| Gweithgaredd penodol | ≥40U/mg solet |
| DNA | Dim wedi'i ganfod |
| RNase | Dim wedi'i ganfod |
| Biofaich | ≤50CFU/g solet |
| Gweddillion asid niwcleig | <5pg/mg solet |
Priodweddau
| Ffynhonnell | Albwm Tritirachium |
| Rhif CE | 3.4.21.64(Ailgyfunol o albwm Tritirachium) |
| Pwysau moleciwlaidd | 29kDa (SDS-TUDALEN) |
| Pwynt isoelectrig | 7.81 Ffig.1 |
| pH optimwm | 7.0-12.0 (Pob un yn perfformio gweithgaredd uchel) Ffig.2 |
| Tymheredd gorau posibl | 65 ℃ Ffig.3 |
| Sefydlogrwydd pH | pH 4.5-12.5 (25 ℃, 16h) Ffig.4 |
| Sefydlogrwydd thermol | Islaw 50 ℃ (pH 8.0, 30 munud) Ffig.5 |
| Sefydlogrwydd storio | Wedi'i storio ar 25 ℃ am 12 mis Ffig.6 |
| Actifyddion | SDS, wrea |
| Atalyddion | Diisopropyl fflworophosphate;fflworid benzylsulfonyl |
Amodau Storio
Storiwch y powdr lyophilized ar -25 ~ -15 ℃ am amser hir i ffwrdd o olau;Ar ôl diddymu, aliquot i gyfaint priodol ar gyfer storio tymor byr ar 2-8 ℃ i ffwrdd o ysgafn neu storio tymor hir ar -25 ~ -15 ℃ i ffwrdd o olau.
Rhagofalon
Gwisgwch fenig amddiffynnol a gogls wrth ddefnyddio neu bwyso, a chadwch nhw wedi'u hawyru'n dda ar ôl eu defnyddio.Gall y cynnyrch hwn achosi adwaith alergaidd i'r croen a llid llygaid difrifol.Os caiff ei anadlu, gall achosi symptomau alergedd neu asthma neu ddyspnea.Gall achosi llid anadlol.
Diffiniad uned
Diffinnir un uned o NGS Protease K fel faint o ensym sydd ei angen i hydrolyze casein yn 1 μmol L-tyrosine o dan amodau pennu safonol.
Paratoi adweithyddion
| Adweithydd | Gwneuthurwr | Catalog |
| Casein technegolo laeth buchol | Sigma Aldrich | C7078 |
| NaOH | Sinopharm CemegolAdweithydd Co., Ltd. | 10019762 |
| NaH2PO4·2H2O | Sinopharm CemegolAdweithydd Co., Ltd. | 20040718 |
| Na2HPO4 | Sinopharm CemegolAdweithydd Co., Ltd. | 20040618 |
| Asid trichloroacetig | Sinopharm CemegolAdweithydd Co., Ltd. | 80132618 |
| Sodiwm asetad | Sinopharm CemegolAdweithydd Co., Ltd. | 10018818 |
| Asid asetig | Sinopharm CemegolAdweithydd Co., Ltd. | 10000218 |
| HCl | Sinopharm CemegolAdweithydd Co., Ltd. | 10011018 |
| Sodiwm carbonad | Sinopharm CemegolAdweithydd Co., Ltd. | 10019260 |
| Foline-ffenol | Sangon Biotech (Shanghai)Co., Cyf. | A500467-0100 |
| L-tyrosine | Sigma | 93829 |
Adweithydd I:
Swbstrad: 1% Casein o hydoddiant llaeth buchol: toddwch 1g casein llaeth buchol mewn 50ml o hydoddiant sodiwm ffosffad 0.1M, pH 8.0, gwreswch mewn baddon dŵr ar 65-70 °C am 15 munud, ei droi a'i hydoddi, ei oeri â dŵr, wedi'i addasu gan sodiwm hydrocsid i pH 8.0, a gwanhau i 100ml.
Adweithydd II:
Datrysiad TCA: asid trichloroacetig 0.1M, asetad sodiwm 0.2M ac asid asetig 0.3M (pwyswch 1.64g asid trichloroacetig + 1.64g asetad sodiwm + 1.724mL asid asetig yn olynol, ychwanegwch 50mL o ddŵr wedi'i ddadïoneiddio, addaswch â HCl i pH 4 d. 100ml).
Adweithydd III:
Hydoddiant sodiwm carbonad 0.4m (pwyswch 4.24g sodiwm carbonad anhydrus a hydoddi mewn 100mL dŵr)
Adweithydd IV:
Adweithydd ffenol Folin: gwanhau 5 gwaith gyda dŵr deionized.
Adweithydd V:
Diluent ensymau: 0.1 M ateb sodiwm ffosffad, pH 8.0.
Adweithydd VI:
Ateb safonol L-tyrosine: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml L-tyrosine hydoddi â 0.2M HCl.
Gweithdrefn
1. Trowch y sbectroffotomedr UV-Vis ymlaen a dewiswch fesuriad ffotometrig.
2. Gosodwch y donfedd fel 660nm.
3. Trowch y baddon dŵr ymlaen, gosodwch y tymheredd i 37 ℃, sicrhewch nad yw'r tymheredd yn newid am 3-5 munud.
4. Cynheswch swbstrad 0.5mL ymlaen llaw mewn tiwb allgyrchu 2mL ar faddon dŵr 37 ℃ am 10 munud.
5. Tynnwch hydoddiant ensymau gwanedig 0.5mL i mewn i'r tiwb centrifuge wedi'i gynhesu ymlaen llaw am 10 munud.Gosod diluent ensym fel grŵp gwag.
6. Ychwanegwch 1.0 mL adweithydd TCA yn syth ar ôl yr adwaith.Cymysgwch yn dda a deorwch mewn baddon dŵr am 30 munud.
7. Centrifugate adwaith adwaith.
8. Ychwanegwch y cydrannau canlynol yn y drefn a nodir.
| Adweithydd | Cyfrol |
| Supernatant | 0.5 ml |
| 0.4M Sodiwm carbonad | 2.5 mL |
| Adweithydd ffenol Folin | 0.5 ml |
9. Cymysgwch yn dda cyn deor mewn baddon dŵr 37 ℃ am 30 munud.
10. OD660ei benderfynu fel OD1;grŵp rheoli gwag: Defnyddir diluent ensymau i ddisodli hydoddiant ensymau i ganfod OD660fel OD2, OD=OD1-OD2.
11. Cromlin safonol L-tyrosine: 0.5mL crynodiad gwahanol hydoddiant L-tyrosine, 2.5mL 0.4M Sodiwm carbonad, 0.5mL adweithydd ffenol Folin mewn tiwb allgyrchydd 5mL, deor mewn 37 ℃ am 30 munud, canfod ar gyfer OD660ar gyfer crynodiad gwahanol o L-tyrosine, yna cael y gromlin safonol Y = kX + b, lle Y yw'r crynodiad L-tyrosine, X yw OD600.
Cyfrifiad
2: Cyfanswm cyfaint yr ateb adwaith (mL)
0.5: Cyfaint hydoddiant ensym (mL)
0.5: Cyfaint hylif adwaith a ddefnyddir mewn penderfyniad cromogenig (mL)
10: Amser ymateb (munud)
Df: gwanhau lluosog
C: Crynodiad ensymau (mg/mL)
Ffigurau
Ffig.1 gweddillion DNA
| Sampl | Ave C4 | Asid Niwcleig Adfer (pg/mg) | Adfer(%) | Cyfanswm Niwcleaidd asid ( pg/mg) |
| PRK | 24.66 | 2.23 | 83% | 2.687 |
| PRK+STD2 | 18.723 | 126.728 | - | - |
| STD1 | 12.955 |
- |
- |
- |
| STD2 | 16 | |||
| STD3 | 19.125 | |||
| STD4 | 23.135 | |||
| STD5 | 26.625 | |||
| H2O Rhad ac Am Ddim | Amhenderfynedig | - | - | - |
Ffig.2 Y pH optimwm
Ffig.3 Tymheredd optimwm
Ffig.4 Sefydlogrwydd pH
Ffig.5 Sefydlogrwydd thermol
Ffig.6 Sefydlogrwydd storio ar 25 ℃
