Polymeras DNA Taq cadarn
Mae Robustart Taq DNA Polymerase yn bolymeras DNA cychwyn poeth.Gall y cynnyrch hwn nid yn unig atal yn well yr adwaith amhenodol a achosir gan anelio amhenodol paent preimio neu agregu paent preimio yn y broses o baratoi system PCR a'i chwyddo.Felly, mae ganddo benodoldeb rhagorol ac mae'n fwy effeithiol ar gyfer ymhelaethu ar dempledi crynodiad isel, ac mae'n addas ar gyfer adwaith mwyhau PCR amlblecs.Ar ben hynny, mae gan y cynnyrch hwn gymhwysedd da iawn, a gellir cael canlyniadau ymhelaethu sefydlog mewn gwahanol fathau o adweithiau PCR.
Cydrannau
1.5 U/μL polymeras DNA Taq cadarn
2.10 × PCR Clustog II (Mg²+ am ddim) (dewisol)
3.25 mM MgCl2(dewisol)
* Nid yw 10 × PCR Buffer II (Mg²+ am ddim) yn cynnwys dNTP a Mg²+, ychwanegwch dNTPs a MgCl2wrth baratoi'r system adwaith.
Ceisiadau a Argymhellir
1.Ymhelaethiad cyflym.
2.Ymhelaethiad lluosog.
3.Ymhelaethiad uniongyrchol ar waed, swabiau, a samplau eraill.
4.Canfod clefydau anadlol.
Cyflwr Storio
-20 ° C ar gyfer storio tymor hir, dylid ei gymysgu ymhell cyn ei ddefnyddio, osgoi rhewi-dadmer yn aml.
* Os bydd dyodiad yn digwydd ar ôl rheweiddio, mae'n normal;argymhellir cydbwyso i dymheredd yr ystafell cyn ei gymysgu a'i ddefnyddio.
Diffiniad Uned
Diffinnir un uned actif (U) fel swm yr ensym sy'n ymgorffori 10 nmol o deocsiriboniwcleotid i ddeunydd anhydawdd asid ar 74°C am 30 munud gan ddefnyddio DNA sberm eog wedi'i actifadu fel templed/primer.
Rheoli Ansawdd
1.purdeb electrofforetig SDS-PAGE yn fwy na 98%.
2.Sensitifrwydd ymhelaethu, rheolaeth swp-i-swp, sefydlogrwydd.
3.Dim gweithgaredd niwcleas alldarddol, dim endonuclease alldarddol neu halogiad exonuclease
Cyfarwyddiadau
Gosod Adwaith
| Cydrannau | Cyfrol (μL) | Crynhoad Terfynol |
| 10 × PCR Clustog II (Mg²+ am ddim)a | 5 | 1 × |
| dNTPs (10mM yr un dNTP) | 1 | 200 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 | 1-4 mM |
| Polymeras DNA Taq cadarn (5U/μL) | 0.25-0.5 | 1.25-2.5 U |
| 25 × cymysgedd Primerb | 2 | 1 × |
| Templed | - | ＜ 1 μg/adwaith |
| ddH2O | I 50 | - |
Nodiadau:
1) a.Nid yw'r byffer yn cynnwys dNTP a Mg²+, ychwanegwch dNTPs a MgCl2wrth baratoi'r system adwaith.
2) b.Os caiff ei ddefnyddio ar gyfer qPCR/qRT-PCR, dylid ychwanegu stilwyr fflwroleuol at y system adwaith.Fel arfer, bydd crynodiad primer terfynol o 0.2 μM yn rhoi canlyniadau da;os yw'r perfformiad adwaith yn wael, gellir addasu'r crynodiad preimio yn yr ystod o 0.2-1 μM.Mae crynodiad y stiliwr fel arfer wedi'i optimeiddio yn yr ystod o 0.1-0.3 μM.Gellir cynnal arbrofion graddiant crynodiad i ddod o hyd i'r cyfuniad gorau o baent preimio a stiliwr.
Protocol beicio thermol
| PCR rheolaiddproses | |||
| Cam | Tymheredd | Amser | Beiciau |
| Cyn-denatureiddio | 95 ℃ | 1-5 munud | 1 |
| Dadnatureiddio | 95 ℃ | 10-20 eiliad | 40-50 |
| Anelio / Estyniad | 56-64 ℃ | 20-60 eiliad | |
| PCR cyflymproses | |||
| Cam | Tymheredd | Amser | Beiciau |
| Cyn-denatureiddio | 95 ℃ | 30 eiliad | 1 |
| Dadnatureiddio | 95 ℃ | 1-5 eiliad | 40-45 |
| Anelio / Estyniad | 56-64 ℃ | 5-20 eiliad | |
Nodiadau
1.Ni ddylai cyfradd chwyddo DNA polymeras cyflym fod yn llai nag 1 kb/10 s.Mae cyfradd codi a chwympo tymheredd, modd rheoli tymheredd ac effeithlonrwydd dargludiad gwres gwahanol offerynnau PCR yn amrywio'n fawr, felly argymhellir gwneud y gorau o'r amodau adwaith gorau posibl ar gyfer yr offeryn PCR cyflym penodol.
2.Mae'r system yn hynod addasadwy, gyda phenodoldeb a sensitifrwydd uwch.
3.Yn addas i'w ddefnyddio fel adweithyddion canfod PCR sensitifrwydd uchel, a gellir eu defnyddio mewn adweithiau mwyhau PCR amlblecs.
4.Gweithgaredd polymeras 5′→3′, gweithgaredd ec-niwcleas 5′→3′;dim gweithgaredd exonuclease 3′→5′;dim swyddogaeth prawfddarllen.
5.Yn addas ar gyfer profi ansoddol a meintiol o PCR a RT-PCR.
6.Pen 3′ y cynnyrch PCR yw A, y gellir ei glonio'n uniongyrchol i fector T.
7.Argymhellir y dull tri cham ar gyfer paent preimio â thymheredd anelio isel neu ar gyfer ymhelaethu ar ddarnau mwy na 200 bp.
