UNG sy'n sensitif i dymheredd

Mae UNG sy'n Sensitif i dymheredd (TS-UNG) yn fynegiant ailgyfunol yn E. coli.Mae'r ensym yn cataleiddio rhyddhau uracil am ddim o DNA llinyn sengl a dwbl sy'n cynnwys uracil ac mae'n anactif yn erbyn RNA.O'i gymharu â'r ensym UNG confensiynol o darddiad genyn E. coli, mae gan yr ensym TS-UNG weithgaredd uwch ar dymheredd isel (20 ℃ ~ 37 ℃) ac mae'n sensitif i dymheredd ac yn hawdd ei anactifadu (50 ℃), gan osgoi diraddio mwyhad sy'n cynnwys dUTP cynhyrchion ar dymheredd ystafell gan y gweithgaredd gweddilliol a all aros ar ôl anactifadu'r ensym UNG confensiynol.Felly, mae ensym TS-UNG nid yn unig yn addas ar gyfer adwaith atal halogiad PCR, ond mae hefyd yn cyd-fynd yn dda â rhaglen ymhelaethu RT-PCR a gellir ei ddefnyddio mewn adwaith atal halogiad RT-PCR.

Cais a Argymhellir

Helaethiad Atal Halogiad

Cyflwr Storio

-20 ° C ar gyfer storio tymor hir, dylid ei gymysgu ymhell cyn ei ddefnyddio, osgoi rhewi-dadmer yn aml.

Clustog storio

20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, Stabilizer, 50% Glyserol.

Diffiniad Uned

Swm yr ensym sydd ei angen i ddiraddio 1µg o DNA un edefyn sy'n cynnwys basau dU mewn 1 awr ar 37°C yw 1 uned o actifedd (U).

Rheoli Ansawdd

1.purdeb electrofforetig SDS-PAGE yn fwy na 98%

2.Gweithgaredd diraddio, rheolaeth swp-i-swp, sefydlogrwydd

3.Dim gweithgaredd niwcleas alldarddol, dim endonuclease alldarddol neu halogiad exonuclease.

Cyfarwyddiadau

Nodyn: a: Os caiff ei ddefnyddio ar gyfer qPCR/qRT-PCR, dylid ychwanegu'r stiliwr fflwroleuol i'r system adwaith.Fel arfer, gall crynodiad primer terfynol o 0.2 μM roi canlyniadau da;pan fo'r perfformiad adwaith yn wael, gellir addasu'r crynodiad preimio yn yr ystod o 0.2-1 μM.Fel arfer, mae crynodiad y stiliwr wedi'i optimeiddio yn yr ystod o 0.1-0.3 μM.Gellir cynnal arbrofion graddiant crynodiad i ddod o hyd i'r cyfuniad gorau o baent preimio a stiliwr.

Nodiadau

1.Mae tymheredd adwaith gorau posibl ensym TS-UNG yn gymharol isel, a gellir ei optimeiddio yn yr ystod o 20 ℃ ~ 37 ℃, gellir optimeiddio dos yr ensym a'r amser adwaith yn yr ystod o 0.1 ~ 0.5 U, 5 ~ 10 mun;a gall yr ensym gael ei anactifadu yn y broses o drawsgrifio gwrthdro.

2.Mae'n addas ar gyfer PCR a RT-PCR i atal halogiad.

3.Osgowch rewi-dadmer yn aml, a pheidiwch â bod yn agored i amrywiadau tymheredd mawr.

4.Mae gan wahanol enynnau i'w mwyhau effeithlonrwydd defnyddio dUTP gwahanol a sensitifrwydd i ensym UNG, felly, os yw'r defnydd o system UNG yn arwain at ostyngiad mewn sensitifrwydd canfod, dylid addasu ac optimeiddio'r system adwaith, os oes angen cymorth technegol arnoch, cysylltwch â ein cwmni.