2 × Sensi Direct Premix-UNG (Probe qPCR)
Cat Rhif: HCB5151A
Mae SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) wedi'i gynllunio i berfformio PCR yn uniongyrchol o samplau heb echdynnu DNA na pharatoi sampl.Mae'r adweithydd hwn yn cynnwys DNA polymeras cychwyn poeth, uracil DNA glycosylase (UNG), Atalydd RNase, MgCl2, dNTPs (gyda dUTP yn lle dTTP), a sefydlogwyr, ar gyfer PCR meintiol (qPCR).Mae'r adweithydd hwn yn rhagffurfio goddefgarwch atalydd uchel, ac felly gellir ei gymhwyso'n uniongyrchol i ganfod samplau fel swab gwddf, poer, gwaed cyfan gwrth-geulo, plasma, a serwm heb echdynnu DNA.Mae'r adweithydd yn defnyddio byffer perchnogol ar gyfer qPCR gydag ensymau cymysg o polymeras DNA gwrth-ataliol ac ensym UNG.Felly, gall gael ymhelaethiad da o enynnau targed mewn samplau sy'n cynnwys atalyddion ac atal ymhelaethu positif ffug a achosir gan lygredd gweddilliol ac aerosol PCR.Mae'r adweithydd hwn yn gydnaws â'r rhan fwyaf o offerynnau PCR meintiol fflwroleuol, megis Cymhwysol Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche ac yn y blaen.
Cydrannau
1. 50×SensiDirect Enzyme/UNG Mix
2. Byffer Premix SensiDirect 2 × (dUTP)
Amodau storio
Dylid cadw'r holl gydrannau ar -20 ℃ ar gyfer storio hirdymor a 4 ℃ am hyd at 3 mis.Cymysgwch yn drylwyr ar ôl dadmer a centrifuge cyn ei ddefnyddio.Osgoi rhewi-dadmer yn aml.
Protocol Beicio
| Cam | Tymheredd | Amser | Beicio |
| Treuliad | 50 ℃ | 2 mun | 1 |
| Ysgogi polymeras | 95 ℃ | 1-5 munud | 1 |
| Denatur | 95 ℃ | 10-20s | 40-50 |
| Anelio/Estyniad | 56-64 ℃ | 20-60au |
Cyfarwyddiadau Pibio
| Adweithydd | Cyfrol fesul adwaith | Cyfaint fesul adwaith | Crynhoad Terfynol |
| 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP) | 12.5µL | 25µL | 1 × |
| 50×SensiDirect Ensym/Cymysgedd UNG | 0.5µL | 1µL | 1 × |
| 25×Primer-Probe Cymysgedd1, 2 | 1µL | 2µL | 1 × |
| Sampl3, 4 | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| Cyfanswm cyfaint | 25 μL | 50 μL | - |
1. Mae crynodiad terfynol y primer fel arfer yn 0.2μM.I gael canlyniadau gwell, gellir optimeiddio'r crynodiad preimio o fewn yr ystod o 0.2-1μM.
2. Yn gyffredinol, gellir optimeiddio crynodiad y stiliwr o fewn yr ystod o 0.1-0.3μM.Mae'r crynodiad gorau posibl o theprobe yn gysylltiedig â'r offeryn ymhelaethu PCR amser real, y math o stiliwr, a'r math o sylwedd labelu fflwroleuol.Cyfeiriwch at y llawlyfr offeryn neu ofynion penodol pob stiliwr fflwroleuol.
3. Mae gwahanol fathau o samplau yn cynnwys gwahanol fathau a chynnwys atalydd a chopi nifer y genyn targed.Dylid ystyried cyfaint y sampl yn ôl cyflwr gwirioneddol.Gwnewch wanhad o'r sampl trwy ychwanegu dŵr di-niwcleas neu TE Buffer, os oes angen.
4. Cyfrol a argymhellir o wahanol samplau:
| Sampl | Cyfrol am un 50 μL adwaith | Uchafswm cymhareb |
| gwaed cyfan gwrthgeulo | 2.5 μL | 5% |
| Plasma | 15 μL | 30% |
| Serwm | 10 μL | 20% |
| Swab gwddf | 10 μL | 20% |
| Poer | 10 μL | 20% |
Rheoli Ansawdd
1. Canfod swyddogaeth: sensitifrwydd, penodoldeb ac ailadroddadwyedd qPCR.
2. Dim gweithgaredd niwcleas alldarddol: dim llygredd endonuclease exogenous a exonuclease.
Nodiadau Cynnyrch
1. Mae'r cynnyrch hwn yn cyflogi math newydd o DNA polymeras cychwyn poeth, y gellir ei actifadu mewn 1-5 munud. Gan fod ei glustogfa adwaith wedi'i optimeiddio, mae'n fwy addas ar gyfer PCR meintiol fflworoleuedd dwbl neu luosog gan ddefnyddio dull stiliwr.
2. Os yw gwerth Rn yr ymhelaethiad PCR yn rhy isel neu os yw'r ymhelaethiad yn amlwg wedi'i atal, gall lleihau swm y sampl, cynyddu cyfaint adwaith neu wanhau'r sampl yn flaenorol wella'r canlyniadau.
3. Dylai casglu gwaed, saliva, wrin, swab gwddf, ac ati ddilyn y gofynion meini prawf clinigol, a gellir defnyddio sampl ffres i atal diraddio asid niwclëig.
4. Gan fod gan wahanol amplicons effeithlonrwydd defnydd gwahanol i dUTP a sensitifrwydd i UNG, dylid optimeiddio'r adweithyddion os bydd y sensitifrwydd canfod yn lleihau wrth ddefnyddio system UNG.Cysylltwch â ni am gymorth technegol os oes angen.
5. Er mwyn osgoi ymhelaethu ar gynhyrchion PCR sy'n cael eu cario drosodd rhwng adweithiau un cam, mae angen ardal arbrofol benodol a phibed ar gyfer ymhelaethu.Gweithredu gyda menig a newid yn aml a pheidiwch ag agor y tiwb adwaith ar ôl ymhelaethu PCR.
