Hotstart Taq DNA Polymerase
Mae Hot Start Taq DNA Polymerase (addasu gwrthgyrff) yn bolymeras DNA thermostable cychwyn poeth o Thermus aquaticus YT-1, sy'n meddu ar weithgaredd polymeras 5′→3′ a gweithgaredd endonuclease fflap 5′.Mae'r polymeras Taq DNA cychwyn poeth yn bolymeras DNA Taq a addaswyd gan wrthgyrff Taq thermolabile.Cynyddodd addasu gwrthgyrff benodolrwydd, sensitifrwydd, a chynnyrch PCR.
Cydrannau
| Cydran | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| Clustog Taq 5 × HC | 4 × 1 ml | 4 × 10 ml | 4 × 50 ml | 5 × 400 ml |
| Hot Start Taq DNA Polymerase (gwrthgorff wedi'i addasu) (5 U/μL) | 0.1 ml | 1 ml | 5 mL | 10 × 5 ml |
Ceisiadau
10 mM Tris-HCl (pH 7.4 ar 25 ℃), 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol, 0.5% Tween20, 0.5% IGEPALCA-630 a 50% Glycerol.
Cyflwr Storio
Cludo o dan 0 ° C a chael ei storio ar -25 ° C ~ -15 ° C.
Diffiniad Uned
Diffinnir un uned fel swm yr ensym sy'n ymgorffori 15 nmol o dNTP i ddeunydd anhydawdd asid mewn 30 munud ar 75°C.
Rheoli Ansawdd
1.Endonuclease Gweithgaredd:Arweiniodd deori 20 U o ensym gyda 4 μg pUC19 DNA am 4 awr ar 37 ℃ at ddim diraddio canfyddadwy o'r DNA fel y'i pennwyd gan electrofforesis gel.
2.5 kb Lambda PCR:Mae 25 cylch o fwyhau PCR o 5 ng DNA Lambda gyda 1.25 uned o Taq DNA Polymerase ym mhresenoldeb 200 µM dNTPs a 0.2 µM preimwyr yn arwain at y cynnyrch 5 kb disgwyliedig.
3.Gweithgaredd Exonuclease:Nid yw deori adwaith 50 µl sy'n cynnwys lleiafswm o 12.5 U o Taq DNA Polymerase ag oligonucleotid 10 nmol 5'-FAM am 30 munud ar 37 ℃ yn arwain at ddiraddiad canfyddadwy.
4.Gweithgaredd RNase:Arweiniodd deori adwaith 10 µL yn cynnwys 20 U o ensym ag 1μg o drawsgrifiadau RNA am 2 awr ar 37°C at ddim diraddiad canfyddadwy o'r RNA fel y'i pennwyd gan electrofforesis gel.
5.Anactifadu gwres:Nac ydw.
System Adwaith
| Cydrannau | Cyfrol |
| Templed DNAa | dewisol |
| 10 μM Ymlaen Primer | 0.5 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 0.5 μL |
| Cymysgedd dNTP (10mM yr un) | 0.5 μL |
| Clustog Taq 5 × HC | 5 μL |
| Polymeras DNA Taqb(5U/μL) | 0.125 μL |
| Dŵr di-niwclear | Hyd at 25 μL |
Nodiadau:
1) a.
| DNA | Swm |
| Genomig | 1 ng-1 μg |
| Plasmid neu Feirol | 1 tud- 1 ng |
2) b.Gall y crynodiad gorau posibl o Taq DNA Polymerase amrywio o 5-50 uned/ml (0.1-0.5 uned/adwaith 25 µL) mewn cymwysiadau arbenigol.
Protocol beicio thermol
PCR
| Cam | Tymheredd(°C) | Amser | Beiciau |
| Dadnatureiddio cychwynnola | 95 ℃ | 1-3 munud | - |
| Dadnatureiddio | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 Cycles |
| Aneliob | 45-68 ℃ | 15-60 s | |
| Estyniad | 68 ℃ | 1kb/munud | |
| Estyniad Terfynol | 68 ℃ | 5 munud | - |
Nodiadau:
1) Mae dadnatureiddio cychwynnol o 1 munud ar 95 ° C yn ddigon ar gyfer y rhan fwyaf o ymhelaethiadau.Ar gyfer templedi anodd, argymhellir dadnatureiddio hirach o 2-3 munud ar 95 ° C.Gyda PCR cytref, argymhellir dadnatureiddio 5 munud cychwynnol ar 95°C.
2) Mae'r cam anelio fel arfer yn 15-60 s.Mae tymheredd anelio yn seiliedig ar Tm y pâr paent preimio ac fel arfer mae'n 45-68 ℃.
