Rnase Atalydd
Mae atalydd RNase Murine yn atalydd RNase murine ailgyfunol wedi'i fynegi a'i buro o E.coli.Mae'n clymu i RNase A, B neu C mewn cymhareb 1:1 trwy fondio di-cofalent, a thrwy hynny atal gweithgaredd y tri ensym ac amddiffyn RNA rhag diraddio.Fodd bynnag, nid yw'n effeithiol yn erbyn RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H neu RNase o Aspergillus.Profwyd atalydd RNase Murine gan RT-PCR, RT-qPCR ac IVT mRNA, ac roedd yn gydnaws â thrawsgrifiadau gwrthdro masnachol amrywiol, polymerasau DNA a pholymerasau RNA.
O'i gymharu ag atalyddion RNase dynol, nid yw atalydd RNase murine yn cynnwys dau gystein sy'n sensitif iawn i ocsidiad sy'n achosi anactifadu'r atalydd.Sy'n ei gwneud yn sefydlog ar grynodiadau isel o DTT (llai nag 1 mM).Mae'r nodwedd hon yn ei gwneud yn addas i'w defnyddio mewn adweithiau lle mae crynodiadau uchel o DTT yn niweidiol i'r adwaith (ee RT-PCR amser real).
Acais
Gellir defnyddio'r cynnyrch hwn yn eang mewn unrhyw arbrawf lle mae ymyrraeth RNase yn bosibl er mwyn osgoi diraddio RNA, megis:
1.Synthesis o'r llinyn cyntaf o cDNA, RT-PCR, RT-qPCR, ac ati.
2.Yn amddiffyn RNA rhag diraddio yn ystod trawsgrifio/cyfieithu in vitro (ee, system atgynhyrchu firaol in vitro).
3.Atal gweithgaredd RNase yn ystod gwahanu a phuro RNA.
Amodau Storio
Gellir storio'r cynnyrch ar -25 ～- 15 ℃, yn ddilys am 2 flynedd.
Clustog storio
50 mM KCl, 20 mM HEPES-KOH (pH 7.6, 25 ℃), 8 mM DTT a 50% glyserol.
Diffiniad uned
Diffiniwyd faint o atalydd RNase murine sydd ei angen i atal gweithgaredd 5ng o riboniwclease A o 50% fel un uned (U).
Pwysau moleciwlaidd protein
Pwysau moleciwlaidd atalydd RNase murine yw 50 kDa.
Rheoli ansawdd
Exonuclease Gweithgaredd:
Nid yw 40 U o atalydd RNase murine gydag 1 μg λ -Hind III yn treulio DNA ar 37 ℃ am 16 awr yn cynhyrchu unrhyw ddiraddiad fel y'i pennir gan electrofforesis gel agarose.
Gweithgaredd Endonuclease:
Nid yw 40 U o atalydd RNase murine gyda 1μ g λ DNA ar 37 ℃ am 16 awr yn cynhyrchu unrhyw ddiraddio fel y'i pennir gan electrofforesis gel agarose.
Nickio Gweithgaredd:
Nid yw 40U o atalydd RNase murine gyda 1μ g pBR322 ar 37 ℃ am 16 awr yn cynhyrchu unrhyw ddiraddio fel y'i pennir gan electrofforesis gel agarose.
RNase Gweithgaredd:
Nid yw 40U o atalydd RNase murine gyda 1.6μ g MS2 RNA am 4h ar 37 ℃ yn cynhyrchu unrhyw ddiraddiad fel y'i pennir gan electrofforesis gel agarose.
E.DNA coli:
40 U o atalydd RNase murine yn cael ei sgrinio am bresenoldeb DNA genomig E. coli gan ddefnyddio TaqMan qPCR gyda paent preimio penodol ar gyfer y locws rRNA E. coli 16S.Yr halogiad DNA genomig E. coli yw ≤ 0.1 pg/40 U.
Notes
1. Bydd osciliad treisgar neu droi yn arwain at anactifadu ensymau.
2.Yr ystod tymheredd gorau posibl o hyn yr atalydd oedd 25-55 ℃, ac Roedd yn anactifadu ar 65 ℃ ac uwch.
3.Ni chafodd gweithgareddau RNase H, RNase 1 ac RNase T1 eu rhwystro gan atalydd RNase murine.
4.Darganfuwyd ataliad gweithgaredd RNase mewn ystod eang o pH (roedd pH 5-9 i gyd yn weithredol), a gwelwyd y gweithgaredd uchaf yn pH 7-8.
5. Gan fod riboniwcleasau fel arfer yn cadw gweithgaredd dan amodau dadnatureiddio, rhaid cymryd gofal i osgoi dadnatureiddio moleciwlau Atalydd RNase sydd wedi cymhlethu â riboniwcleas.Er mwyn atal rhyddhau ribonuclease gweithredol, dylid osgoi tymereddau uwch na 50 ° C a chrynodiadau uchel o wrea neu gyfryngau dadnatureiddio eraill.
